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Western Blot 实验记录

可填写、可打印的 Western Blot 实验与排错记录单

实验前和实验中填写实验记录单；结果异常时使用排错记录单。除非主动导出，填写内容只保存在当前浏览器。

已填写 0 项；内容仅保存在当前浏览器。

工作表 1

Western Blot 实验记录单

记录计划条件和实际执行条件，尤其保留抗体批次、转膜结果和未饱和成像信息。

工作表 2

Western Blot 失败排查记录单

记录异常表现、已有检查结果、候选原因以及下一轮计划调整的变量。其余条件尽量保持不变，便于判断修改是否有效。

先看一份完整记录怎么写

填写示例：高背景排查记录

TEACH-HB-01 全部为假设/模拟教学记录，不是本站实验或实测验证。

示例对应案例库中的二抗稀释实验。它展示计划、观察和结论分别填在哪里；未执行的步骤和未知的产品信息也有标注。

计划条件

A/C 二抗 1:2,000，B/D 1:4,000；C/D 去一抗。相同阳性材料、转膜、洗膜和采集，仅优化二抗浓度。预先写好成功判据和不同结果的下一步。

设定结果

教学设定 B/D 背景下降，B 同曝光保留目标。它不是观察日志；实际记录只能填你看到的图、像素饱和情况和原始文件位置。没有执行时应写“未执行”，不能用设定补齐。

解释边界

模式仅支持这个场景中的二抗浓度贡献，不能证明目标特异性、检测限或定量有效。独立重复和上样响应范围仍未验证，不能把“看起来更干净”写成方法验证完成。

1 · 实验记录填写示例

填写示例；未指定的信息标为未记录
记录字段教学填写值及实际记录要求
项目 / 实验编号TEACH-HB-01 — 假设二抗滴定教学；未执行。
日期不适用：没有执行实验。真实记录应填实际运行日期与时间。
实验人员假设示例不适用；实际实验填写实验人员姓名。
目标蛋白 / 修饰位点假定全细胞中已知阳性的未修饰目标；未指定蛋白身份/抗体产品。
预期表观分子量50 kDa 为教学设定；实际应核对异构体、加工形式和产品资料。
样本来源、处理和取样时间假设阳性全细胞裂解液，分到匹配的重复泳道。物种、细胞系、处理、取样时间和分装编号：示例未指定。
阳性生物学对照假定对相同目标及一抗已知阳性裂解液；A/B 使用匹配重复材料。实际来源与储存未知。
阴性 / 敲除对照C/D 去一抗但保留匹配裂解液和二抗；它们是检测阶段对照，不是遗传阴性，也不建立目标特异性。示例未设置敲除对照。
内参或总蛋白归一化方案比较等价膜条连续总蛋白以检查匹配；不作相对表达结论，本教学案例未验证目标及归一化信号的上样响应范围。
裂解液、抑制剂和澄清方式计划：使用供应商兼容的全细胞提取以保留目标。没有制备样本，故实际裂解液组成、抑制剂、提取时间、澄清与回收均未记录；A–D 固定同一分装制备方式。
蛋白定量方法和结果无浓度测定或实测结果。仅教学算术：若浓度为 2 µg/µL，20 µg 需要 10 µL 裂解液；实际应替换为兼容方法及实测浓度。
每孔上样量和终体积计划每个重复泳道 20 µg；示范终体积 20 µL：假定 2 µg/µL 裂解液 10 µL + 4× 上样液 5 µL + 水 5 µL。未实际移液或检查胶容量。
上样液、还原剂和加热条件计划终浓度 1× 的目标兼容上样液。未设定还原剂和加热参数，应按目标与抗体说明选择并在组间保持一致；没有实际温度/时间日志。
凝胶体系、浓度、电压和时间适合 50 kDa 目标的小型胶。胶化学/浓度、电泳电压及时间未知，应据实际系统记录填写；比较中使用匹配胶和泳道图。
膜、孔径、转膜体系和参数计划 0.2 µm 硝酸纤维素膜，各组固定膜批次与转膜流程。未设定系统、转膜液、电流/电压/时间及冷却；应遵守实际系统说明，没有执行转膜。
转膜染色及观察结果教学设定观察：目标区域各泳道总蛋白连续；不存在真实染色或图像。实际记录必须关联抗体前未裁切转膜染色图。
封闭剂、浓度、缓冲液和时间CST 兼容示范基线：1× TBS/0.1% Tween-20 中 5% 脱脂奶粉，室温轻柔摇动 1 小时。使用前先查一抗推荐的封闭剂和稀释液。
一抗货号、批次、稀释、缓冲液和孵育未指定教学一抗：货号/批次/稀释倍数未知。A/B 用同种新配一抗和产品推荐稀释/稀释液，示范 4°C 过夜；C/D 仅用相同稀释液。产品和批号：未指定。
二抗、稀释倍数和孵育条件假定兼容 HRP 二抗，未指定产品/批次未知。A/C 1:2,000；B/D 1:4,000；示范室温 1 小时。这些是教学滴定值，不是所有产品的最优倍数。
洗膜液、体积、次数和摇动方式示范基线：每次抗体孵育后，用新鲜 1× TBS/0.1% Tween-20 轻柔摇动洗 3 次、每次 5 分钟，各组托盘覆盖及换液一致。实际膜面积和洗液体积未记录；CST 对 10 × 10 cm 膜指定 15 mL。
底物 / 通道和成像设置各组假定同种 HRP/ECL 产品及底物配制；产品/批次、成像型号和增益未知。匹配加底物到采集延迟；按实际产品混配说明，没有配制或成像。
曝光系列及选用的未饱和图像设定比较：匹配的示范 10 秒曝光，B 目标可见且未截顶。无实测像素或实际曝光系列；真实方法需要原始长短曝光及已证明可用范围。
原始文件和未裁切图位置没有实验原始文件；示意位于 /zh/case-library#lesson-case-secondary。实际应记录原始文件标识及未裁切图位置，不能只留裁切展示图。
观察结果及偏离计划之处假设结果：A/C 仍灰，B/D 背景降低，B 在匹配曝光保留目标。支持本场景二抗浓度贡献；未验证特异性、检测限或定量，独立重复和上样范围确认仍是计划。

2 · 排障记录填写示例

与实验记录配对的受控排障计划和设定复盘
记录字段教学填写值及实际记录要求
案例 / 实验编号TEACH-HB-01 — 假设教学/未执行。
日期不适用；无真实运行日期。教学记录日期不等于实验日期。
观察到的整膜异常整膜设定：泳道间均匀灰背景，预期 50 kDa 条带仍可辨；去一抗条也灰。短曝光减轻背景但所需目标变弱。
未裁切图和曝光记录没有未裁切实验图。排障示意图位于 /zh/case-library#lesson-case-secondary；匹配 10 秒曝光为示范，并非实测。
Marker 和预期条带位置预期目标设为 50 kDa；真实 marker 产品/位置未知。实际记录应保留完整 marker 与膜图。
阳性、阴性和归一化对照A/B 匹配假设阳性裂解液+一抗；C/D 同材料去一抗。总蛋白设为连续；无遗传阴性，目标特异性未解决。
转膜染色结果设定各等价目标区域总蛋白连续；未收集实际染色与转膜后胶。仅在场景中降低大范围转膜嫌疑。
全局、目标、泳道还是位置特异？全局/泳道间膜背景，包含去一抗条；不归于单个样本或固定膜坐标。
最早出现异常的实验环节设定在二抗/ECL 采集后观察；没有中间实验图，具体发生起点未知。
首要候选原因残留二抗过多可能造成整膜背景。去一抗对照随稀释改善，可支持二抗/检测阶段贡献。
另一候选原因洗膜交换不足或底物/托盘污染。一抗交叉反应可并存，但单独不能解释去一抗条灰。
区分两个原因所需的检查结果A/B 有一抗和 C/D 去一抗，匹配阳性裂解液/转膜，洗膜与采集相同；比较二抗稀释对背景及可用目标的影响，而非只看膜是否白。
下一轮计划调整的一个变量唯一优化变量二抗浓度：示范 1:2,000 对 1:4,000。C/D 去一抗是诊断对照，不是另一个优化变量。
保持不变的条件20 µg 匹配裂解液、目标区、胶/转膜/膜、A/B 一抗、封闭/稀释液、孵育时温、洗液组成/体积/换液、ECL 批次、曝光/增益/延迟保持不变；产品批次：未记录。
修改前条件计划 A/C：HRP 二抗 1:2,000，A 有一抗、C 去一抗；基线观察设为灰膜，没有实测修改前数据。
修改后条件计划 B/D：相同二抗 1:4,000，B 有一抗、D 去一抗；预先要求匹配背景下降、保留所需阳性条带、未截顶，并后续独立确认。
重做后的结果假设结果：A/C 灰，B/D 背景较低，B 在匹配 10 秒曝光保留预期条带；无实测强度、图或重复。
目前支持的结论和仍待确认的问题仅支持设定条件下浓度依赖的二抗贡献；独立重复和工作范围验证尚未执行。若 C/D 仍灰，比较洗膜/底物；若 C/D 干净而 A/B 暗，带适当阴性比较一抗稀释/稀释液。未证明特异性，不能据此定量。

3 · 开始真实记录前，先清空示例

  1. 先导出需要保留的浏览器内容，再点“清空”。两份可编辑表格默认空白；“载入教学示例”只在你选择后填写，已有内容时会询问是否替换。
  2. 填写真实样本身份、时间、执行者、试剂货号/批次和系统设置。无法找回的信息写“未记录”，并说明这会限制哪些结论。不要把示例的未知项当作可省略要求。
  3. 把计划与实际偏差同时保留，写原始图位置和饱和检查，而不是只粘贴最终条带。没执行的重复和对照仍写计划；只有实际看到的结果才能进入观察栏。
  4. 表格只在当前浏览器保存，不上传本站。浏览器禁止保存时仍可编辑、打印和导出，但应在关闭前导出 JSON。已载入示例的导出永久保留假设标记，编辑并不会把它变成真实实验。
下载中英教学记录 JSON →查看配套假设案例与示意图 →

示范封闭、孵育、洗膜与二抗基线参考 CST 官方流程。具体抗体的推荐稀释液/倍数优先；教学的二倍滴定与结果由本站设定，不是通用最优方法。 CST 官方流程