Western Blot 实验计算
Western Blot 实验计算工具
这些工具用于计算体积和稀释，并提示单位、体积和移液范围问题。具体实验条件仍需结合抗体说明书、凝胶分离范围、膜说明书和预实验确定。
蛋白上样体积
浓度单位固定为 µg/µL，目标上样量固定为 µg，结果直接为 µL。
体积计算不证明该上样量处于检测线性范围。
单一样本的上样混合液与批量体积
计算每孔样品、上样液、可选还原剂和补水体积，并按孔数和额外损耗生成整批用量。
仅适合同一浓度样本的批量计算；不同样本浓度应分别计算样品和补水。
按 1:N 配制抗体，并自动建议中间稀释
当直接吸取体积低于移液器可靠范围时，自动选择一个可操作的中间稀释倍数。
中间液需要使用与最终孵育兼容的稀释体系，并考虑吸附和保存稳定性。
C₁V₁ = C₂V₂
储液和终浓度必须使用同一种浓度单位；最终体积使用 mL。
TBST 中 Tween-20 体积
按最终体积和目标体积分数计算。常用 0.1% 只是起点，应服从抗体专属协议。
凝胶范围与转膜风险助手
根据目标和归一化蛋白分子量提示需要核对的凝胶范围、是否值得比较梯度胶，以及小分子保留风险。
本工具不输出万能凝胶百分比；最终选择必须核对具体凝胶厂商的分离范围图。
移液前核对
- • 确认输入单位与标签一致；mg/mL 和 µg/mL 需要先换算后再代入公式。
- • 确认计算结果处于移液器的可靠范围；体积过小时采用中间稀释，并记录中间液的配制方式。
- • 确认最终体积中是否还需要加入封闭剂、盐、去污剂、还原剂或其他组分。
- • 记录实际加入体积以及与理论值不同的操作。
- • 凝胶与膜的选择仍需核对具体厂商分离范围和转膜系统说明。
把计算结果写入实验记录单
记录实际体积、抗体批次、转膜条件和成像设置。
核对参数依据
计算结果还需要结合具体实验设计和产品条件判断。