常用配方
Western Blot 常用缓冲液配方
以下列出常用起始配方。不同凝胶体系、转膜设备和抗体可能要求不同组成，使用前请核对具体产品说明书和实验室 SOP。
安全与兼容性提醒
甲醇、冰醋酸、SDS 及其他试剂应在适当防护和机构规范下操作。本站不替代 SDS、安全培训、产品说明书或实验室 SOP。不同凝胶和快速转膜系统可能使用完全不同的专用缓冲液。
1× TBST，1 L（0.1% Tween-20）
组成
- • 100 mL 10× TBS
- • 1.0 mL Tween-20
- • 纯化水定容至 1 L
配制
先混合 TBS 和大部分水，再小心加入 Tween-20，混匀后定容。
注意：部分抗体要求不同的去污剂浓度或使用 PBS 体系；有抗体专属条件时，以说明书为准。
5% 脱脂奶粉 TBST，100 mL
组成
- • 5.0 g 脱脂奶粉
- • 1× TBST 定容至 100 mL
配制
搅拌时逐步加入奶粉。尽量现配使用；出现结块、异味或可见污染时弃用。
注意：磷酸化抗体是否使用奶粉应以具体一抗说明书验证过的条件为准。
5% BSA TBST，100 mL
组成
- • 5.0 g BSA
- • 1× TBST 定容至 100 mL
配制
轻柔溶解，避免大量起泡。确认 BSA 级别和缓冲体系与检测方式兼容。
注意：BSA 可改善部分抗体的表现，也可能使另一些抗体背景升高，应按具体抗体条件选择。
1× Tris–glycine 转膜液，1 L，含 20% 甲醇
组成
- • 100 mL 10× Tris–glycine 转膜液
- • 200 mL 甲醇
- • 纯化水定容至 1 L
配制
在合适容器中配制，并按转膜系统要求预冷。甲醇操作必须遵循机构化学安全规范。
注意：大分子蛋白可能需要降低甲醇并延长或降低温度进行转膜；小分子蛋白可能需要缩短转膜时间。具体条件优先遵循设备和膜说明书。
1× Tris–glycine–SDS 电泳液
组成
- • 25 mM Tris base
- • 192 mM glycine
- • 0.1%（w/v）SDS
配制
从经过验证的浓缩储液稀释通常最容易保证重复性。除非凝胶体系明确要求，否则不要自行调 pH。
注意：本配方用于常规 Tris–glycine SDS-PAGE，不能与所有 Bis-Tris 或专有预制胶体系互换。
RIPA 裂解液：常见组成
组成
- • 25 mM Tris-HCl，pH 7.6
- • 150 mM NaCl
- • 1% NP-40 或等效非离子去污剂
- • 1% 脱氧胆酸钠
- • 0.1% SDS
配制
条件允许时使用经过验证的商业或机构配方。蛋白酶抑制剂以及需要时的磷酸酶抑制剂应在使用前加入。
注意：RIPA 较强，但仍不能充分溶解所有膜蛋白、细胞骨架蛋白或聚集蛋白，应根据目标蛋白验证提取效率。
0.1% Ponceau S / 5% 醋酸，100 mL
组成
- • 0.10 g Ponceau S
- • 5 mL 冰醋酸
- • 纯化水定容至 100 mL
配制
完全溶解；有颗粒时过滤。短时间染色，保存整膜图后用水或机构 SOP 指定方式脱色。
注意：Ponceau S 适合快速检查转膜，但灵敏度有限；用于定量时需要确认所采用方法的适用范围。
每瓶缓冲液至少标注
名称、浓度、pH（如适用）、配制日期、配制人、储存条件、加入抑制剂的时间，以及任何偏离标准配方的修改。陈旧或受污染的缓冲液可能造成斑点和高背景。