从一张膜走到可解释的结果
漂亮的条带只是起点。按下面三个问题保留证据，再决定调整实验还是继续定量；本站的示例、算式和记录单可以帮助把判断过程写清楚。
01 · 上样量有可用范围吗？
不要直接复制某个 µg 数。先区分总裂解液和纯化蛋白，再比较上样梯度中靶标与参照的响应。
查看样本区别与上样算例 →02 · 失败发生在哪一步？
结合膜染色、转膜后胶、阳性对照与整膜模式定位问题；一轮只比较一个清楚定义的改变。
查看受控转膜比较 →03 · 相对值能追溯吗？
保存原图和 ROI，按面积扣除局部背景，逐样本归一化；不同曝光和技术重复不能冒充独立生物样本。
从像素强度复算相对值 →
Western Blot 实验流程
从当前实验步骤进入对应专题。各页分别说明起始条件、需要检查的结果，以及什么情况下应调整方法。
01
样本制备
根据目标所在组分选择提取方法，确认蛋白定量与裂解液兼容，并确定合适的样本输入量。
查看专题 →
02
SDS-PAGE
选择凝胶体系和分离范围，在转膜前检查泳道形态以及目标分子量区域是否分离清楚。
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03
转膜
选择转膜方式和膜，并确认目标分子量区域的蛋白已经离开凝胶且保留在膜上。
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04
封闭与抗体
按具体抗体说明选择封闭液和稀释液，再分别调整一抗、二抗和孵育条件。
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05
检测与成像
确认二抗标记、底物或荧光团与成像系统匹配，并保存未饱和的原始图像。
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06
定量
计算相对变化前，确认目标和归一化信号均处于可用响应范围。
查看专题 →
实验结果有问题？
先根据整张膜上的异常现象分类，再进入对应的独立排错专题。
实验工具与资料
需要设计实验、计算或记录条件、参考诊断案例，或追溯技术建议来源时，可从这里进入。