结果排查 · 无信号
Western Blot 无信号：先判断信号链在哪一步中断
“没有条带”并不是单一问题。先分清整张膜都没有信号、只有目标蛋白缺失，还是阳性对照也失败，再决定下一步检查什么。
先确认
先看整膜和对照，不要先加抗体
整张膜都空白时，成像、底物、转膜或抗体组合都可能全局失败；如果内参正常而目标缺失，则目标表达、提取、该分子量区域的转膜和一抗验证更值得优先检查。
第一轮检查
尽量利用已经做完的这张膜定位问题，再决定是否需要重做。
成像与检测
核对通道、曝光、底物配制、成像仪设置；条件允许时用已知 HRP 或荧光阳性对照检查检测端。
转膜
调出 Ponceau S 或其他总蛋白图。整膜几乎无蛋白时，问题发生在抗体之前。
抗体组合
核对一抗宿主、二抗特异性和标记方式，以及货号、保存状态和产品推荐稀释条件。
阳性样本
使用已知表达目标的样本，并在未裁切图像中检查预期表观分子量附近是否存在条带。
建议保留的结果
根据现象决定下一步
优先处理最早出现异常的检查结果。
观察到
目标、内参和阳性对照全部无信号
更可能提示
更符合全局检测、转膜或抗体组合失败。
下一步
先检查成像/底物，再看总蛋白转膜和抗体匹配。
先不要做
不要同时增加一抗、二抗和曝光。
观察到
整膜总蛋白转膜图几乎空白
更可能提示
问题发生在免疫检测之前。
下一步
检查夹层方向、电接触、转膜液、气泡和转膜设备。
先不要做
转膜恢复前不要优化一抗。
观察到
内参正常，但目标蛋白没有
更可能提示
全局检测链可工作，但目标仍可能未表达、提取不足、目标区域转膜不足或一抗不识别。
下一步
检查阳性样本、目标表达、提取、预期分子量和目标区域转膜。
先不要做
不要把“内参正常”当成所有蛋白都转好的证据。
观察到
其他方法或抗体能检出阳性目标，但当前一抗不能
更可能提示
一抗性能或表位可及性更可疑。
下一步
先恢复到供应商验证过的样本、稀释液、稀释倍数和孵育条件。
先不要做
直接转膜检查正常时，不要继续反复改转膜。
相关专题
技术参考
以下资料用于支持排查顺序；具体抗体和检测系统仍应优先遵循对应产品说明。
- Thermo Fisher Scientific — Western Blotting Troubleshooting
用于核对转膜、弱/无信号、高背景、非特异性条带和膜相关问题。
- Cell Signaling Technology — Western Blot Troubleshooting Guide
用于核对抗体、封闭、洗膜、曝光和特异性问题。
- Bio-Rad — Introduction to Western Blotting
用于说明电泳、转膜、免疫检测和结果解释之间的流程关系。