Western Blot 结果排查
Western Blot 结果排查：先描述你真正看到的异常
不要一开始同时修改多项实验条件。先结合整张膜、对照、转膜结果和分子量 Marker 给异常分类，再进入对应的独立排错专题。
选择最接近的结果模式
这些异常被拆开，是因为它们对应的检查顺序并不相同。
改条件前先完成 5 项检查
1. 保留未裁切图像
裁图可能掩盖异常究竟是全局、单泳道还是固定在膜的某个位置。
2. 查看对照
确认阳性对照、内参/总蛋白对照和目标阴性对照是否符合预期。
3. 查看转膜结果
查看 Ponceau S 或其他总蛋白图，必要时看转膜后胶，再判断是否需要改抗体。
4. 核对目标分子量区域
结合 Marker、预期表观分子量以及相关异构体或加工形式判断。
5. 下一轮只改一个有判别力的变量
让下一次实验能够区分最可能的原因，而不是同时修改多项条件。
仍然无法分类时，按实验阶段定位
排错参考资料
- Thermo Fisher Scientific — Western Blotting Troubleshooting
- Cell Signaling Technology — Western Blot Troubleshooting Guide
- Bio-Rad — Introduction to Western Blotting
交互式排错
用 4 项观察确定排查顺序
工具根据整膜、对照和转膜结果给出检查顺序，用于缩小原因范围，不直接判定唯一原因。
完成 4 个问题后，这里会显示建议的检查顺序。
教学图示
实验流程与检查图示
以下示意图用于说明实验步骤和排错方法，图中条带为模拟示例。
六种常见异常膜图
教学示意图并列展示整膜无信号、弱信号、高背景、额外条带、拖尾和位置型缺失，便于先描述异常表现再排查原因。
Western Blot 排错流程
结合未裁切膜图、对照、总蛋白转膜图和转膜后胶，判断问题最早出现在哪个实验环节，再安排下一轮验证。