SDS-PAGE · 排错
SDS-PAGE 排错：拖尾、Smiling 与迁移异常
利用 Marker、泳道形态、不同样品之间的差异和运行记录，判断问题发生在凝胶、运行条件还是样品本身。多数 SDS-PAGE 问题在转膜前就能看到。
本页解决的问题
先区分全局运行问题和样品特异问题
拖尾、smiling、迁移停滞和泳道变形可来自选胶、制胶、运行缓冲液/功率或样品化学组成。排查时先看 Marker 和所有泳道是否一起异常，还是只有某些样品出现问题。
重跑前检查现有记录
凝胶和运行记录还在时，尽量把信息保留下来。只剩裁切后的 Western Blot 图时，很多电泳问题已经无法判断。
保存完整运行记录
记录凝胶体系/百分比、Marker、染料前沿终点、电压/电流模式、运行时间、缓冲液，以及异常升温、电流或漏液。
先看 Marker 是否也异常
Marker 和所有样品一起弯曲或停滞，优先查凝胶、缓冲液、设备和运行；Marker 干净而只有部分样品变形，优先查样品化学组成和上样。
比较异常与上样量的关系
拖尾或泳道变宽随上样量增加而加重，支持上样过量、黏度或高浓度样品基质参与。
核对样品组成
盐、非离子去污剂、RIPA 成分、过量还原剂、核酸造成的黏度、脂质和沉淀，都可能影响 stacking 与迁移。
常见异常模式
拖尾 / 泳道变宽
优先检查上样量和样品化学组成：过载、降解、黏度、盐、去污剂或澄清不足。排除技术原因后，再考虑真实生物学异质性。
整张胶 smile / frown
很多泳道甚至 Marker 同向弯曲时，电场强度、散热、缓冲液或设备几何问题更可疑。
只有部分泳道变形
Marker 干净而实验样品变形，通常指向样品组成、上样体积、盐/去污剂或还原/加热差异。
迁移停滞 / 电流异常
先检查电路、液位、缓冲液稀释、胶盒安装和电源模式，再考虑修改样品或凝胶百分比。
按问题出现的顺序排查
1. 查看 Marker 和整张胶的形态
怎么做
先比较 Marker、染料前沿和所有泳道，再关注目标条带。
当场检查
判断异常是全局性、泳道特异性还是位置特异性。
何时停下来处理
Marker 本身也异常时，应先检查运行体系。
2. 核对凝胶与运行体系
怎么做
核对凝胶化学体系/百分比、运行缓冲液、液位、胶盒安装、电源模式和厂家推荐设置。
当场检查
缓冲液属于该凝胶体系，设备运行状态与说明书相符。
何时停下来处理
缓冲液身份/稀释不确定、凝胶物理损伤、槽体漏液，或运行超过该系统推荐条件。
3. 核对上样与样品化学组成
怎么做
检查总上样量、最终盐/去污剂/还原剂浓度、黏度、澄清程度，以及所有样品是否具有一致最终上样缓冲组成。
当场检查
通过上样量梯度、稀释或清理样品，可以在不改变后续 Western Blot 条件的情况下判断样品因素。
何时停下来处理
样品肉眼可见黏稠/沉淀，或异常泳道的缓冲体系明显与其他泳道不同。
4. 重新判断凝胶分离范围
怎么做
如果泳道形态正常，但目标区域被挤在一起或贴近前沿，则比较针对该分子量范围验证过的凝胶体系/百分比/梯度。
当场检查
下一张胶的公开分离范围应覆盖目标和需要区分的最近条带。
何时停下来处理
如果问题在转膜前已经清楚可见，应先解决凝胶分离，而不是修改转膜或抗体。
用上样量梯度检查 SDS-PAGE 拖尾
如果上样量越高，泳道越宽、垂直拖尾越明显，可在保持抗体条件不变的情况下重跑较低上样量梯度，并保留 Marker 与完整泳道形态。
用于区分原因的信息
观察 → 解释 → 下一步
下一轮尽量只调整一个能够区分原因的上游变量，并保持转膜和抗体条件不变。
观察
上样越多，拖尾和泳道变宽越明显
解释
上样过量和/或高浓度样品基质高度可疑。
下一步
加入明显更低的上样量，并在存在问题时降低黏度、过高盐或去污剂。
先不要做
不要增加抗体浓度或依赖后期锐化图像。
观察
Marker 与大多数泳道同方向 smiling
解释
更可能是发热、过强电场、缓冲液或设备层面的全局运行问题。
下一步
使用该胶体系指定的缓冲液和厂家推荐功率条件，并确保足够液量和散热。
先不要做
整张胶的弯曲不应解释为生物学分子量改变。
观察
Marker 干净，但一两个样品横向扩散或拖尾
解释
样品特异的离子强度、去污剂、黏度或上样组成更可疑。
下一步
根据情况稀释、脱盐或清理该样品，并统一最终上样缓冲组成后重跑。
先不要做
其他泳道已经正常时，优先检查异常样品本身。
观察
所有迁移都很慢/停滞，或电流明显异常
解释
电路、缓冲液浓度、液位、胶盒安装或电源模式可能错误。
下一步
停止运行，逐项对照说明书检查缓冲液、液位、电极/导线、胶盒和电源设置。
先不要做
无限延长运行时间不会解决电路或缓冲液错误。
观察
泳道形态正常，但目标分子量区域分不开
解释
限制因素更可能是凝胶分离范围。
下一步
改用在该分子量窗口有更好公开分离范围的凝胶体系/百分比/梯度。
先不要做
电泳分辨率合格前，不应先优化转膜或抗体稀释。
观察
手灌胶失败模式随批次变化
解释
聚合或制胶变异可能是隐藏变量。
下一步
标准化配方时间、引发剂处理、界面/泳道验收，或比较合适的预制胶。
先不要做
凝胶本身不稳定时，不能先把差异归因于生物样品。
相关实验指南
排错参考资料
以下厂家资料用于核对常见异常模式。具体数值与产品和胶规格有关，最终仍以实验室实际系统说明书为准。
- Bio-Rad — Performing Protein Electrophoresis
用于核对 smiling、泳道变形、横向扩散与过高功率、盐、上样及缓冲/装置问题之间的关系。
- Thermo Fisher — Western Blot / Protein Gel Electrophoresis Troubleshooting
用于核对过载、盐、去污剂和高浓度裂解液与泳道拖尾、分辨率下降的关系。
- Thermo Fisher — Protein Gel 1D Electrophoresis Support
用于核对条带拖尾、变形或缺失时的凝胶选择、上样量、盐和冷却问题。