RIPA 용해 버퍼

방사면역침전 분석 버퍼 - 웨스턴 블롯에서 세포 용해에 가장 일반적으로 사용됨

Components

• 50 mM Tris-HCl, pH 7.4
• 150 mM NaCl
• 1% NP-40 (또는 IGEPAL CA-630)
• 0.5% Sodium deoxycholate
• 0.1% SDS
• 사용 직전에 신선하게 추가: 1 mM PMSF, 프로테아제 억제제, 포스파타제 억제제

Preparation

탈이온수에 성분을 용해하고, pH를 7.4로 조정하고, 여과 멸균하고, 4°C에 저장하세요. 사용 직전에 억제제를 추가하세요. 최종 부피: 1 L.

Laemmli 샘플 버퍼 (2X)

SDS-PAGE 전기영동용 표준 샘플 버퍼

Components

• 125 mM Tris-HCl, pH 6.8
• 4% SDS
• 20% Glycerol
• 0.004% Bromophenol blue
• 10% 2-mercaptoethanol (신선하게 추가, 또는 100 mM DTT 사용)

Preparation

성분을 혼합하세요(환원제 제외), 실온에 저장하세요. 사용 직전에 환원제를 추가하세요. 2X 버퍼의 경우, 샘플과 1:1로 혼합하세요. 환원 조건의 경우, 항상 신선한 2-ME 또는 DTT를 추가하세요.

습식 전사 버퍼

겔에서 PVDF 또는 니트로셀룰로스 멤브레인으로 단백질을 전사하기 위한

Components

• 25 mM Tris base
• 192 mM Glycine
• 20% Methanol (PVDF 멤브레인용)
• 0.1% SDS (선택사항, 큰 단백질 >100 kDa용)

Preparation

800 mL 탈이온수에 3.03 g Tris base와 14.4 g glycine을 용해하고, 200 mL 메탄올을 추가하고, pH를 8.3으로 조정하고, 1 L로 만드세요. 4°C에 저장하세요. 니트로셀룰로스의 경우, 메탄올을 10-15%로 감소시키세요.

TBST (Tween-20이 포함된 Tris 완충 식염수)

웨스턴 블롯용 표준 세척 및 차단 버퍼

Components

• 20 mM Tris-HCl, pH 7.6
• 150 mM NaCl
• 0.1% Tween-20

Preparation

900 mL 탈이온수에 2.42 g Tris base와 8.77 g NaCl을 용해하고, HCl로 pH를 7.6으로 조정하고, 1 mL Tween-20을 추가하고, 1 L로 만들고, 잘 혼합하세요. 실온에 저장하세요.

TBST에 5% 무지방 우유

대부분의 웨스턴 블롯 응용을 위한 표준 차단 용액

Preparation

100 mL TBST에 5 g 무지방 분유를 용해합니다. 잘 혼합하고, 용해되지 않은 입자를 제거하기 위해 거즈를 통해 여과해야 할 수 있습니다. 신선하게 준비하거나 4°C에 최대 1주일 보관합니다. 사용 전에 잘 흔들어주세요.

TBST에 3-5% BSA

인산화된 단백질용 또는 우유가 높은 배경을 일으킬 때의 차단 용액

Preparation

100 mL TBST에 3-5 g BSA(소 혈청 알부민, Fraction V)를 용해합니다. 거품을 피하기 위해 부드럽게 혼합합니다. 필요하면 0.45 μm 필터를 통해 여과합니다. 4°C에 보관합니다. 1주일 이내에 사용하세요.

Ponceau S 염색 용액

멤브레인에서 단백질 전사를 시각화하기 위한

Components

• 0.1% Ponceau S
• 5% Acetic acid

Preparation

5% 아세트산 100 mL에 0.1 g Ponceau S를 용해합니다. 사용 전에 여과하세요. 실온에 저장하세요. 멤브레인을 2-5분간 염색하고, 물로 세척하여 밴드를 시각화합니다.