RIPA Lysis Buffer

ラジオイムノプレシピテーションアッセイバッファー - 最も一般的な溶解バッファー、ほとんどのタンパク質に良好。界面活性剤（NP-40、デオキシコール酸、SDS）を含みます。

Components

• 50 mM Tris-HCl, pH 7.4
• 150 mM NaCl
• 1% NP-40 (or IGEPAL CA-630)
• 0.5% Sodium deoxycholate
• 0.1% SDS
• Add fresh before use: 1 mM PMSF, protease inhibitors, phosphatase inhibitors

Preparation

成分を脱イオン水に溶解し、pHを7.4に調整し、ろ過滅菌し、4°Cで保存します。使用直前に阻害剤を添加します。最終容量：1L。

Laemmli Sample Buffer (2X)

SDS-PAGE電気泳動用の標準サンプルバッファー。タンパク質を変性し、負の電荷を与えます。

Components

• 125 mM Tris-HCl, pH 6.8
• 4% SDS
• 20% Glycerol
• 0.004% Bromophenol blue
• 10% 2-mercaptoethanol (add fresh, or use 100 mM DTT)

Preparation

成分を混合します（還元剤を除く）、室温で保存します。使用直前に還元剤（2-MEまたはDTT）を添加します。

Wet Transfer Buffer

ゲルからPVDFまたはニトロセルロース膜にタンパク質を転写するため。メタノール濃度は膜タイプとタンパク質サイズに応じて調整します。

Components

• 25 mM Tris base
• 192 mM Glycine
• 20% Methanol (for PVDF membranes)
• 0.1% SDS (optional, for large proteins >100 kDa)

Preparation

3.03gのTris baseと14.4gのグリシンを800mLの水に溶解します。メタノールを200mL添加します（最終20%）。水で1Lに調整します。pHは通常調整不要（約8.3）。

TBST（Tween-20を含むTris緩衝生理食塩水）

ウェスタンブロッティング用の標準洗浄およびブロッキングバッファー。

Components

• 20 mM Tris-HCl, pH 7.6
• 150 mM NaCl
• 0.1% Tween-20

Preparation

8.8gのNaCl、0.2gのKCl、3gのTris baseを800mLの水に溶解します。Tween-20を0.5mL（0.05%）添加します。HClでpHを7.4に調整します。水で1Lに調整します。

TBST中の5%脱脂乳

ほとんどのウェスタンブロッティング用途の標準ブロッキング溶液

Preparation

100mLのTBSTに5gの脱脂粉乳を溶解します。よく混合し、未溶解粒子を除去するためにチーズクロスでろ過する必要がある場合があります。新鮮に調製するか、4°Cで最大1週間保存します。使用前に十分に振とうします。

TBST中の3-5% BSA

リン酸化タンパク質用、またはミルクが高背景を引き起こす場合のブロッキング溶液

Preparation

100mLのTBSTに3-5gのBSA（ウシ血清アルブミン、Fraction V）を溶解します。泡立ちを避けるために軽く混合します。必要に応じて0.45μmフィルターでろ過します。4°Cで保存します。1週間以内に使用します。

Ponceau S染色液

膜上のタンパク質転写を可視化するため

Components

• 0.1% Ponceau S
• 5% Acetic acid

Preparation

5%酢酸100mLに0.1gのPonceau Sを溶解します。使用前にろ過します。室温で保存します。膜を2-5分間染色し、水ですすいでバンドを可視化します。